Estrategias experimentales

Para identificar a los RhoGEFs y otras proteínas de transducción de señales relevantes en procesos de transducción de señales angiogénicas, empleamos rutinariamente herramientas bioinformáticas, bioquímicas, de biología molecular y celular.

Nuestro trabajo cotidiano involucra el empleo de técnicas de cultivo celular, análisis de proteínas por electroforesis e inmunodetección; análisis, aislamiento, y manipulación de ácidos nucleicos, particularmente amplificación y clonación de DNA y su uso para la transfección de células endoteliales y otras células de mamífero que utilizamos como modelo; además de la transformación de bacterias y levaduras.

Empleamos métodos genéticos y proteómicos para aislar elementos moduladores de la migración endotelial y de procesos de angiogénesis. Hacemos uso del sistema de doble híbrido en levaduras, mismo que ofrece un enorme potencial para la identificación y aislamiento de elementos funcionales directamente por interacción molecular.

Así mismo, producimos proteínas recombinantes en bacterias para determinar interacciones proteicas in vitro y evaluamos la migración polarizada de células endoteliales y la angiogénesis in vitro en respuesta a estímulos con actividad angiogénica. Analizamos la dinámica celular de proteínas de transducción de señales fusionadas a proteínas fluorescentes. Inhibimos la expresión de proteínas de interés mediante el empleo de shRNA.